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          轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)

          簡要描述:轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)產品特點:1、靈敏度高,抗污染能力強,定量準確,重復性好;2、樣本處理與PCR擴增在同一個PCR反應管中即可完成;3、無需加熱
          產品說明:1.高便捷性。 2.靈敏度高。 3.特異性強。 4.精密性好。 5.結果準確可靠。 6.嚴格的質量標準。
          結構及組成:聚合酶鏈式反應液(PCR反應液)、RNA

          • 產  地:上海
          • 廠商性質:經銷商
          • 更新時間:2022-02-10
          • 訪  問  量:2617

          詳細介紹

          品牌其他品牌貨號HXG740
          規格50T供貨周期現貨
          主要用途科研使用應用領域生物產業

                 轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)

          產品名稱】

          通用名稱:轉基因大豆 MON87705 品系核酸檢測試劑盒 (熒光-PCR 法)

          Name :Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PCR Method)

          【包裝規格】50T/盒

          本試劑盒適用于檢測轉基因植物的 MON87705 基因,用于篩查待檢測植物中是否含有 MON87705 成分。其檢測結果僅供參考。

          【檢驗原理】

          本試劑盒用國家標準的 MON87705 特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術進行轉基因成分的檢測。

          【試劑組成】

          酶液

          50μL×1 管

          MON87705 反應液

          500μL×2 管

          MON87705 陽性質控品

          50μL ×1 管

          陰性質控品

          250μL ×1 管

          說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

          【儲存條件及有效期】

          -20℃避光保存、運輸、避免反復凍融,反復凍融次數不超過 5 次。有效期 12 個月。

          【適用儀器】

          ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

          【標本采集】稱取 200g 樣品。【保存和運輸】

          上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 0℃。

          轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)使用方法】

          1. 樣品處理(樣本處理區)

          1.1 樣本前處理

          固體樣本:用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品研磨至細粉狀。

          1.2 DNA 提取

          對于固體標本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法:

          1) 每個樣品取 2 個平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品,加入 1mL 預冷至 4℃的抽提液,劇烈搖動混勻后,在冰上靜止 5min,4℃條件下 10000g 離心 15min,棄上清液;

          2) 加入 600μL 預熱至 65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在 65℃恒溫保持 40min, 期間顛倒混勻 5 次;

          3) 室溫條件下10000g 離心10min,取上清液轉移至新離心管中,加入5μLRNAseA, 37℃恒溫 30min,分別用等體積苯酚:異戊醇溶液:異戊醇溶液各抽提一次;

          4) 室溫條件下,10000g 離心 10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液(pH=6.5,-20℃放置 2-3h;

          5)  4℃條件下,10000g 離心 15min,棄上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;

          6) 加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取試劑盒。

          油脂樣本請直接選用市售油脂 DNA 提取試劑盒,按說明操作。

          2. 試劑配制(試劑準備區)

          根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

          試劑

          MON87705 反應液

          酶液

          用量

          20μL

          1μL

          3. 加樣(樣本處理區)

          將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

          4. PCR 擴增(核酸擴增區)

          4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

          1.1 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25μL;熒光通道選擇: 檢測通道

          Reporter Dye)FAM, 淬滅通道Quencher Dye)選擇 NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。

          1.2 推薦循環參數設置:

          步驟

          循環數

          溫度

          時間

          收集熒光信號

          1

          1 cycle

          95℃

          10min

          2

          40 cycles

          94℃

          15sec

          55℃

          30sec

          轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法) 結果分析判定

          結果分析條件設定

          設置 Baseline  Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline  start (一般可在 3~15 范圍內調節)、stop (一般可在 5~20 范圍內調節),以及Threshold  Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

           結果判斷

          陽性:檢測通道 Ct ≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線;

          可疑:檢測通道 35<Ct ≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35<Ct ≤ 38,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;

          陰性:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

          3. 質控標準

          陰性質控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示;

          陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。




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